产品描述

enLwaCas13a（enhanced LwaCas13a）是一种基于野生型LwaCas13a升级改造后获得的高活力突变体。与野生型LwaCas13a的作用机制一样，enLwaCas13a可在crRNA引导下特异性识别并剪切靶标ssRNA。此外，enLwaCas13a也具有反式剪切活性(即旁路剪切活性)，即当enLwaCas13a蛋白与crRNA、靶标RNA结合形成三元复合物后，便会被激活针对非特异ssRNA序列的反式剪切活性，并将体系中的任意序列ssRNA序列切碎。该活性也被广泛用于靶标核酸的快速检测试剂盒的开发。

产品组分

a. enLwaCas13a Nuclease浓度为10 μM，即10 pmol/μL；100 pmol规格的总体积为10 μL，1,000 pmol规格的总体积为100 μL；

保存条件

-80℃或-20℃储存；干冰运输。

活性定义

在总体积为20 μL的1 × HOLMES Buffer for Cas13a [pH 7.6]反应体系中，37℃反应条件下，1 min内剪切1 pmol ssRNA探针所需的Cas13a酶量定义为1 transU。

例：若某批次LwaCas13a酶的反式切割活性为27.0 transU/pmol，则表明1 pmol的该批次LwaCas13a酶可在1 min内，在上述指定的反应条件下，反式切割27 pmol ssRNA探针。

实验流程

1. 反式剪切实验

● 反式剪切体系中各组分的用量可以根据不同的实验目的进行调整，用量较少时可先将各组分稀释后加入体系，enLwaCas13a Nuclease可用1×HOLMES Buffer for Cas13a稀释，稀释后需立即使用（若要稀释后的Cas13酶长期保存，请使用Cas13 Dilution Buffer，#32013），crRNA、Target RNA及ssRNA Reporter可用Nuclease-free Water稀释，但极低浓度的Target RNA（例如LOD实验）建议用0.1% Tween 20稀释并使用低吸附的离心管、吸头等耗材。

实时荧光定量PCR仪检测荧光信号，37℃反应，每30 sec采集一次荧光信号。

注意事项

1. Cas13a的顺式剪切(cis-cleavage): Cas13a在crRNA的引导下，特异性地剪切target RNA，且对target RNA的PFS序列要求并不严格。

2. Cas13a的反式剪切(trans-cleavage): 当target RNA存在时，Cas13a/crRNA与target RNA形成三元复合物(Cas13a/crRNA/target RNA)，同时，Cas13a被激发反式剪切活性，将反应体系中任意序列的单链RNA切碎。

3. 为防止RNase污染，请保持实验区干净整洁，操作时需穿戴干净的手套、口罩，实验所用枪头、离心管等耗材均为RNase-free。

4. Cas13a蛋白对热敏感，容易失活，应全程冰上配置反应体系，并在使用后立即将酶置于-20℃保存。

5. 本公司提供的Cas13a蛋白及反应缓冲液不含任何除Cas13a外的任何其它核酸酶活性。

6. 本产品仅供科研使用。