南京师范大学海洋科学与工程学院孟庆国课题组研究了MIRA 和 MIRA-LFD 螺原体检测方法的开发和应用。相关研究成果以“Development and application of the MIRA and MIRA-LFD detection methods of Spiroplasma eriocheiris”为题在国际学术期刊journal of invertebrate pathology在线发表，期刊影响因子为3.4。
研究背景：
中华绒螯蟹养殖已成为我国水产养殖的主导和支柱。由螺原体引起的颤抖病（TD）是中华绒螯蟹最具破坏性的疾病。因此，建立一种快速简便的检测方法，对疾病的预防、控制和及时治疗具有重要意义。本研究构建了一种能在室温下快速简便检测螺原体的核酸扩增方法-多酶恒温快速扩增法（MIRA）和能以视觉的形式迅速读出的方式MIRA检测结果的MIRA-LFD。
研究结果：
本研究根据螺原体的保守基因序列，构建并筛选了合适的扩增引物。设计并标记了相关的特异性探针和所选的特异性扩增引物。然后对 MIRA 和 MIRA-LFD 反应条件进行了优化。结果表明，MIRA 和 MIRA-FFD 分别能在 37℃的温度下用 30 分钟和 10 分钟鉴定出螺原体。
为了研究 MIRA 和 MIRA-LFD 的特异性，选择了三种革兰氏阴性菌（枯草杆菌、苏云金芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌）、三种革兰氏阳性菌（大肠杆菌、嗜水气单胞菌和鼠伤寒沙门氏菌）和螺原体。结果表明，MIRA 和 MIRA-LFD 对 螺原体具有高度特异性，对其他六种病原体没有反应。
然后对比了 PCR、MIRA 和 MIRA-LFD 三种检测方法的灵敏度。结果表明，PCR 的检测限为 1 ng/L，而 MIRA 和 MIRA-LFD 的检测限为 10 pg/L
最后使用优化过的MIRA和MIRA-LFD 反应体系、反应引物、反应条件，针对随机提取的17个样本DNA以及阳性对照与阴性对照分别进行了中华绒螯蟹螺原体MIRA，MIRA-LFD和PCR检测. 通过分析比对不同检测方法的结果，判断本实验所建立的中华绒螯蟹螺原体MIRA和MIRA-LFD检测方法可行。
总之，本研究构建的MIRA 和 MIRA-LFD 可用于快速检测中华绒螯蟹螺原体，具有快速、灵敏和特异性强的优点，不需要任何专业设备即可检测到螺原体。这些检测方法对于中华绒螯蟹水产养殖中的颤抖病控制至关重要。在这种情况下，可以及时采取早期检测措施，避免病原体的传播，减少中华绒螯蟹颤抖病造成的损失，从而促进水产养殖业的健康发展。
文中涉及使用的检测试纸条以及MIRA核酸扩增试剂盒如下表所示，沃博生物现货提供：
货号
产品
规格
JY0209
双靶标HybriDetect侧向层析试纸条（彩虹型）
50T
JY0201
单靶标HybriDetect侧向层析试纸条（彩虹型）
50T
JY0307
Tiosbio® CRISPR单酶切及扩增产物检测试纸条
50T
JY0301
CRISPR Cas12/13 HybriDetect试纸条
50T
JY0308
Tiosbio® CRISPR双酶切检测试纸条（变色龙）
50T
WLB8201KIT
DNA恒温快速扩增试剂盒（基础型）
48T
WLE8202KIT
DNA恒温快速扩增试剂盒（荧光型）
48T
WLN8203KIT
DNA恒温快速扩增试剂盒（胶体金试纸条型）
48T
WLRB8204KIT
RNA恒温快速扩增试剂盒（基础型）
48T
WLRE8205KIT
RNA恒温快速扩增试剂盒（荧光型）
48T
WLRN8206KIT
RNA恒温快速扩增试剂盒（胶体金试纸条型）
48T
WLB5001
DNA恒温快速扩增试剂盒（液体基础型）
100T
WLN5002
DNA恒温快速扩增试剂盒（液体胶体金型）
100T
WLR5003
DNA恒温快速扩增试剂盒（液体荧光型）
100T
WLRB5001
RNA恒温快速扩增试剂盒（液体基础型）
100T
WLRN5002
RNA恒温快速扩增试剂盒（液体胶体金型）
100T
WLRE5003
RNA恒温快速扩增试剂盒（液体荧光型）
100T