TSA/PSA是一种成熟的细胞信号放大技术，当TSA/PSA与我们光稳定性、水溶性的结合后，产生的荧光信号具有比传统免疫组织化学、免疫细胞化学和免疫荧光方法产生的信号更高的度和灵敏度。是美国AAT Bioquest自主研发的与功能类似的信号放大方法，其荧光信号强度比广泛使用的tyramide（TSA）试剂高10-50倍。感兴趣的朋友一起来看看吧！
TSA/PSA原理
酪胺信号放大（TSA）是一种基于辣根过氧化酶（HRP）的催化活性对靶蛋白或核酸进行高密度原位标记的酶学检测方法。原理为酪胺Tyramide的过氧化物酶反应（已标记荧光的酪胺在HRP催化H2O2下形成共价键结合位点）产生的大量酶促产物与目标蛋白的酪氨酸残基共价结合，从而使目标蛋白标记上特异的荧光或生物素。
图1.TSA/PSA原理及工作流程图。通过类似于传统ICC和IHC方法的工作流程，TSA/PSA试剂可以通过几个简单的步骤实现对所需目标的灵敏检测。
表1.TSA/PSA技术与传统免疫荧光对比
|
|
TSA/PSA多标免疫荧光 |
传统免疫荧光 |
|
靶点数目 |
不受限制（多可同时染色7-10种） |
一般标记3种（含DAPI）,>3种标记难度较大 |
|
一抗种类 |
同一种属的不同抗体即可满足要求 |
不同种属的不同抗体 |
|
二抗种类 |
连接辣根过氧化物酶的同种属二抗 |
连接荧光探针的不同种属二抗 |
|
染色策略 |
任何样本无需任何染色策略，简单的重复前一步的染色过程，样本/靶点的差异不影响染色过程，使用简单方便 |
样本抗原的空间位置的差异，需要设计复杂的染色策略。样本/靶点的差异导致染色策略的差异，染色过程复杂、多变 |
|
染色效果 |
高染色分辨率和染色特异性，信号强度更强,更稳定,淬灭时间更长，无背景影响，各靶点的信噪比大大提高，尤其适合组织基于单细胞的定量分析 |
亮度较弱,容易淬灭,各种抗体间存在互相影响，背景较高，对基于单细胞的定量分析不利。 |
|
实验成本 |
同一种属的一抗和二抗，价格相对便宜。 简单的染色策略和无需任何重复的预实验，即可掌握整个染色技术，大大缩小了预实验的材料损耗。 一抗和二抗工作浓度更低,单次费用更低 |
不同种属的抗体价格存在差异，一般种属的价格高。 不同种属的二抗，价格存在差异，一般的种属价格高。 寻找合适的染色策略，复杂的多次重复的预实验大大的增加了实验成本 |
|
应用范围 |
二抗具备通用性，因此实验室中所有的研究领域均可使用 |
二抗不具备通用性，实验室中应用领域受到局限 |
TSA/PSA特点
|
TSA |
PSA |
|
1.适用广，多色标记 2.多重标记可避免抗体种属交叉问题 3.染色特异性好，信号强度高，适合低丰度靶标 4.石蜡切片样本荧光染色背景干净 |
1.检测灵敏度提高了100多倍，比标准IHC，ICC，IF方法高出100倍 2.改进的荧光信号比酪胺（TSA）试剂高10至50倍 3.PSA 自由基的更高反应性允许在HRP-靶相互作用位点更快速，有效和更稳定记Styramide缀合物。 4.在不牺牲灵敏度的情况下，PSA可以使用更少量的抗体/探针 |
图2.分别用iFluor 488 PSA和Alexa Fluor 488 TSA染色甲醛固定的石蜡包埋人肺腺癌阳性组织的染色结果图。人肺腺癌阳性组织切片用兔抗EpCam抗体染色，然后用polyHRP标记的山羊抗兔IgG二抗孵育，后使用iFluor 488 PSA （Cat#45020）和Alexa Fluor 488 TSA分别染色。图像显示iFluor 488 PSA与Alexa Fluor 488 TSA相比提高了荧光IHC的灵敏度。
图3.分别用iFluor 488 酪胺和Alexa Fluor 488 酪胺染色甲醛固定的石蜡包埋人肺腺癌阳性组织的染色结果图。人肺腺癌阳性组织切片用兔抗EpCam抗体染色，然后用HRP标记的山羊抗兔IgG二抗孵育。显影：iFluor 488 酪胺（左）；Alexa Fluor 488 酪胺（右）。核染色：DAPI
图4.Styramide 超级信号放大试剂盒的信号强度对比。 （A）将HeLa细胞固定，透化并用各种浓度的兔抗微管蛋白一抗标记，建议的稀释浓度为：1：500。 然后将细胞直接与AlexaFluor488缀合的山羊抗兔IgG二抗染色，后分别与HRP标记的山羊抗兔IgG二抗、AlexaFluor 488酪胺和iFluor 488 Styramide（#45205）染色。 使用FITC滤光片组拍摄荧光图像，并以相同的曝光时间进行分析。 （B）测量相对荧光信号强度，并比较不同检测方法之间的强度。
相关产品推荐
|
分类 |
货号 |
产品名称 |
Ex(nm) |
Em(nm) |
|
TSA试剂 |
45100 |
iFluor 488 酪胺 |
491 |
514 |
|
45105 |
iFluor 555 酪胺 |
552 |
567 |
|
|
45110 |
iFluor 647 酪胺 |
649 |
665 |
|
|
11070 |
AF488 酪胺 |
491 |
518 |
|
|
11075 |
AF546 酪胺 |
554 |
570 |
|
|
11082 |
AF594 酪胺 |
590 |
617 |
|
|
11065 |
Cy3 酪胺 |
555 |
565 |
|
|
11066 |
Cy5 酪胺 |
644 |
665 |
|
|
11061 |
Azido-Cy5酪胺 |
644 |
665 |
|
|
PSA试剂 |
45000 |
iFluor 350 Styramide |
345 |
442 |
|
45020 |
iFluor 488 Styramide |
491 |
514 |
|
|
45025 |
iFluor 546 Styramide |
541 |
557 |
|
|
45027 |
iFluor 555 Styramide |
552 |
567 |
|
|
45030 |
iFluor 568 Styramide |
568 |
587 |
|
|
45035 |
iFluor 594 Styramide |
592 |
619 |
|
|
45045 |
iFluor 647 Styramide |
649 |
665 |
|
|
45050 |
iFluor 680 Styramide |
676 |
695 |
|
|
45055 |
iFluor 700 Styramide |
685 |
710 |
|
|
45065 |
iFluor 750 Styramide |
749 |
775 |
|
|
45070 |
iFluor 790 Styramide |
782 |
811 |
|
|
试剂盒 |
45200 |
iFluor 350 Styramide超级信号放大成像试剂盒，含羊抗兔IgG |
345 |
442 |
|
45205 |
iFluor 488 Styramide超级信号放大成像试剂盒，含羊抗兔IgG |
491 |
514 |
|
|
45220 |
iFluor 555 Styramide超级信号放大成像试剂盒，含羊抗兔IgG |
552 |
567 |
|
|
45230 |
iFluor 594 Styramide超级信号放大成像试剂盒，含羊抗兔IgG |
592 |
619 |
|
|
45240 |
iFluor 647 Styramide超级信号放大成像试剂盒，含羊抗兔IgG |
649 |
665 |