百日咳作为由百日咳鲍特菌引发的高传染性急性呼吸道传染病，对婴幼儿健康威胁极大，即便疫苗普及，全球仍呈地方性流行趋势，且临床症状不典型、易与其他呼吸道感染混淆，传统培养、PCR等检测方法耗时长、依赖复杂设备，难以满足基层与即时检测需求。近期发表于《Archives of Microbiology》的一项重磅研究，成功构建基于RPA-CRISPR-Cas12a技术的百日咳鲍特菌快速检测平台，为百日咳精准、快速诊断提供了全新解决方案。

Part.1

关键技术

1. RPA重组酶聚合酶扩增

恒温37℃快速扩增，20分钟完成核酸放大，无需热循环仪，适合现场使用。

2. CRISPR-Cas12a特异识别与切割

crRNA引导Cas12a精准结合靶序列，激活反式切割，特异性极强，无交叉反应。

3. 双模式信号输出

- 荧光法：切割FAM-BHQ1探针，荧光信号上升；

- 免疫层析法：切割FAM-生物素探针，试纸条肉眼判读。

其中使用了沃博生物提供的CRISPR Cas12/13 HybriDetect试纸条，货号JY0301.

Part.2

研究结果

（一）方法建立成功

成功构建RPA-CRISPR-Cas12a-荧光与RPA-CRISPR-Cas12a-试纸条两种快速检测体系，操作简便，仅需恒温金属浴/水浴即可完成。

（二）特异性

两种方法对14种常见病原体均无交叉反应，仅对BP产生强阳性信号，特异性优异。

（三）灵敏度

最低检测限均为10² copies/μL，具备良好的临床检测灵敏度。

（四）临床样本验证

- 检测40例临床样本：阳性25例，阴性15例

- 与qPCR结果完全一致

- 灵敏度100%，特异性100%，总符合率100%

（五）优势总结

- 快速：全程≤50 min

- 简便：恒温反应，无需PCR仪

- 可视化：试纸条肉眼判读

- 安全：石蜡油封盖降低气溶胶污染

- 准确：临床灵敏度与特异性均达100%

Part.3

总结

该研究建立的RPA-CRISPR-Cas12a方法，将恒温快速扩增与CRISPR高特异识别相结合，有效弥补传统检测短板。该方法不依赖大型仪器，适合基层医疗机构、社区诊所、现场筛查等资源有限场景，可实现“样本进—结果出”的即时诊断。

与现有技术相比，本方法在速度、便携性与准确性上实现平衡，可用于百日咳早期筛查、疫情监测与临床快速分诊。同时，该技术平台具备扩展性，可进一步开发为多病原体联检体系，提升呼吸道感染病原鉴别效率。

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