产品简介

本试剂盒采用 GST 标签纯化树脂来高效完成 GST 标签融合蛋白的体外 pull-down 实验。实验前先将目标基因 连入带有 GST 标签的原核表达载体中，在大肠杆菌中表达出 GST 融合蛋白。利用 GST 标签纯化树脂与 GST 标 签的强亲和性，纯化 GST 融合蛋白，再与样本裂解液孵育，样本中的互作蛋白即可被吸附而分离。

试剂盒成分

＊注意：该试剂盒包含足够完成12、24或40个反应的试剂，每个反应使用45 μL 树脂。由于每次pull-down实验至少需要设置一个实验组和一个阴性对照组，因此一次实验至少需要使用2个反应的试剂量。

额外所需材料

1. 自备材料：表达 GST-诱饵蛋白的大肠杆菌（或纯化的 GST-诱饵蛋白）、表达 GST 空载体的大肠杆菌（或纯 化的 GST 蛋白）、PBS。

2.所需仪器：混匀仪、低温离心机、超声波破碎仪。

使用说明

I 注意事项

1. 请勿干燥、冷冻或剧烈涡旋树脂，这些操作会导致树脂聚集而降低结合能力。

2. 为保证树脂均匀分布，请在使用前通过反复颠倒、轻微涡旋彻底混匀树脂。

3. 实验前需要先做 western blot 实验确定 GST 融合蛋白和待测互作蛋白是否可溶表达。

4. 在吸取树脂前，请将移液枪枪头尖部剪掉 1～2mm。

5. 树脂的离心步骤需在低速条件下操作，离心速度大于 5000×g 可能会导致树脂聚集和再悬浮困难。

6. 洗脱缓冲液为强酸性，最终的洗脱产物中含有 GST 融合蛋白及其互作蛋白。

7. 实验的具体样品量和孵育时间依赖于每个特定体系，可能需要优化才能得到最大产量。

8. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

说明书：F1604 GST Pull-Down 试剂盒.pdf (212.58 K)