磷脂酶D（ PLD ）检测试剂盒(分光光度法50T/48S)

货号	SH0474	售价（元）	4080
规格	50T/48S	CAS号

产品简介
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货号	名称	规格
SH0474	磷脂酶D（ PLD ）检测试剂盒(分光光度法50T/48S)	50管/48样

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：

磷脂酶D（EC3.1.4.4）即磷脂酰胆碱水解酶，是催化磷酸二酯键水解和碱基交换反应的一类酶的总称，广泛存在于高等动植物和细菌等多种生物体中，具有参与细胞脂质代谢、信号传导、生物膜形成的抗逆境胁等生理功能。

测定原理：

磷脂酶D催化水解磷脂酰胆碱末端的磷脂酰二酯键生成磷脂酸和胆碱，胆碱在胆碱氧化酶催化作用下生成甜菜碱和过氧化氢，过氧化氢在过氧化氢酶的作用下将4-氨基安替比林和重蒸酚氧化成粉红色物质，在500nm处有特征吸收峰。

组成：

产品名称	SH0474-50T/48S	Storage
提取液：液体	50ml	4℃
试剂一：液体	55ml	4℃避光
试剂二：液体	8ml	4℃避光
试剂三：粉剂	1瓶	-20℃避光
试剂四：液体	35ml	4℃避光
标准品：液体	1ml	4℃避光
说明书	一份

试剂三：粉剂×1瓶，-20℃避光保存。临用前加3ml无水乙醇充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

自备仪器和用品：

天平、研钵、超速冷冻离心机、可见分光光度计、1 ml玻璃比色皿、恒温水浴锅，无水乙醇。

酶液提取

1. 组织：按照质量（g）：提取液体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1ml提取液）加入提取液，冰浴匀浆后于4℃，10000g离心5min，取全部上清于4℃、100000g离心30min，弃上清，取沉淀溶于1ml试剂一。

2. 细胞：按照细胞数量（10⁴个）：提取液体积（ml）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1ml提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后于4℃，10000g离心5min，取全部上清于4℃、100000g离心30min，弃上清，取沉淀溶于1ml试剂一。

3. 血清：直接测定。

测定操作

	空白管	标准管	测定管
试剂一（μl）	100
试剂二（μl）	150	150	150
标准品（μl）		100
样品（μl）			100
试剂三（μl）	50	50	50
充分混匀，30℃反应30min，沸水浴10min，打开盖子，自然冷却5min。
试剂四（μl）	700	700	700
30℃反应30min，于1ml玻璃比色皿，空白管调零，测定500nm处吸光值，分别记为A标准管和A测定管。