酰基转移酶（AAT）检测试剂盒（微量法 100T/96S）
| 货号 | SH0461 | 售价（元） | 7200 |
| 规格 | 100T/96S | CAS号 |
- 产品简介
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货号 |
名称 |
规格 |
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SH0461 |
酰基转移酶（AAT）检测试剂盒（微量法 100T/96S） |
100管/96样 |
测定意义：
AAT是一个多功能蛋白大家族，主要负责催化生物体内各种酰基化和去酰基化反应，在基因表达、代谢和信号传导中具有重要作用。
测定原理：
AAT催化乙酰CoA转移乙酰基到丁醇，释放的CoA还原DTNB生成TNB；TNB在412nm有吸收峰，测定412 nm吸光度增加速率可计算AAT活性。
组成：
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产品名称 |
SH0461-100T/96S |
Storage |
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提取液：液体 |
100ml |
4℃ |
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试剂一：液体 |
20ml |
4℃ |
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试剂二：粉剂 |
1瓶 |
-20℃ |
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试剂三：粉剂 |
1支 |
4℃避光 |
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说明书 |
一份 |
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自备仪器和用品：
研钵、冰、台式离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、恒温水浴锅、无水乙醇。
粗酶液提取：
1. 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1ml提取液）进行冰浴匀浆。8000g，4℃离心10min，取上清置冰上待测。
细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：提取液体积（ml）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1ml提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
2. 液体：直接检测。
AAT测定操作：
1、分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长到412 nm，蒸馏水调零。
2、工作液的配制：临用前在试剂二瓶中加入18ml试剂一，充分混匀待用。用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
3、试剂三的配制：临用前加无水乙醇1ml充分溶解待用，用不完的试剂4℃保存。
4、 空白管：在Ep管或96孔板中加入10μL提取液和180μL工作液，充分混匀，35℃反应15min，加入10μL试剂三，充分混匀，25℃静置10min，测定412nm处吸光值，记为A空白管。
5、 测定管：在Ep管或96孔板中加入10μL样本和180μL工作液，充分混匀，35℃反应15min，加入10μL试剂三，充分混匀，25℃静置10min，测定412nm处吸光值，记为A测定管。△A=A测定管- A空白管，空白管只要做一管。
AAT活性计算：
a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下
（1）按照蛋白浓度计算
活性单位定义：每毫克蛋白每分钟催化产生1nmol TNB定义为一个酶活单位。
AAT (nmol/min/mg prot) = △A ÷（
×d）×V反总÷（V样×Cpr）÷T = 98.04×△A÷Cpr
（2）按照样本质量计算
活性单位定义：每克组织每分钟催化产生1nmol TNB定义为一个酶活单位。
AAT (nmol/min /g 鲜重) = △A ÷（
×d）×V反总÷(W×V样÷V样总) ÷T
= 98.04×△A÷W
（3）按细胞数量计算
活性单位定义：每104个细胞每分钟催化产生1nmol TNB定义为一个酶活单位。
AAT (nmol/min/104cell) = △A ÷（
×d）×V反总÷(细胞数量×V样÷V样总) ÷T
= 98.04×△A÷ 细胞数量
（4）按液体体积计算
活性单位定义：每毫升样品每分钟催化产生1nmol TNB定义为一个酶活单位。
AAT (nmol/min/ml) = △A ÷（
×d）×V反总÷V样÷T
= 98.04×△A
：TNB消光系数，13600L/mol/cm；d：比色皿光径：1cm；V反总：反应总体积，0.2ml；V样：加入反应体系中上清液体积，0.01ml；V样总：加入提取液体积，1ml；Cpr：蛋白含量，mg/ml；W：样本质量，g；T：反应时间，15 min。
b.使用96孔板测定的计算公式如下
（1）按照蛋白浓度计算
活性单位定义：每毫克蛋白每分钟催化产生1nmol TNB定义为一个酶活单位。
AAT (nmol/min/mg prot) = △A ÷（
×d）×V反总÷（V样×Cpr）÷T
=196.08×△A÷Cpr
（2）按照样本质量计算
活性单位定义：每克组织每分钟催化产生1nmol TNB定义为一个酶活单位。
AAT (nmol/min /g 鲜重) = △A ÷（
×d）×V反总÷(W×V样÷V样总) ÷T
= 196.08×△A÷W
（3）按细胞数量计算
活性单位定义：每104个细胞每分钟催化产生1nmol TNB定义为一个酶活单位。
AAT (nmol/min/104cell) = △A ÷（
×d）×V反总÷(细胞数量×V样÷V样总) ÷T
=196.08×△A÷ 细胞数量
（4）按液体体积计算
活性单位定义：每毫升样品每分钟催化产生1nmol TNB定义为一个酶活单位。
AAT (nmol/min/ml) = △A ÷（
×d）×V反总÷V样÷T
= 196.08×△A
：TNB消光系数，13600L/mol/cm；d：96孔板光径：0.5cm；V反总：反应总体积，0.2ml；V样：加入反应体系中上清液体积，0.01ml；V样总：加入提取液体积，1ml；Cpr：蛋白含量，mg/ml；W：样本质量，g；T：反应时间，15min。