测定意义：

生物体内巯基主要包括谷胱甘肽巯基和蛋白质巯基。前者不仅能够修复氧化损伤的蛋白质，而且参与活性氧清除，后者对于维持蛋白质构象具有重要作用。通过测定总巯基含量和GSH含量，能够间接测定蛋白质巯基含量。

测定原理：

巯基基团与5,5’- 二硫代-双-硝基苯甲酸（DTNB）反应，生成黄色化合物，在412nm处有最大吸收峰。

组成：

自备仪器和用品：

天平、研钵、可见分光光度计、恒温水浴锅、1ml玻璃比色皿、乙醇和蒸馏水。

样品的制备：

1. 按照组织质量（g）：水体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1ml提取液）进行冰浴匀浆，然后8000g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2. 血清，培养液：稀释5倍后测定，可取0.1ml样本，加入0.4ml蒸馏水，混匀，置冰上待测。

测定操作表：

1、分光光度计预热30min，调节波长至412nm，双蒸水调零。

2、操作表

在1ml玻璃比色皿中加入如下试剂

计算公式：

总巯基标准曲线：y =3.6222 x- 0.0037，R² = 1，x为标品浓度，单位μmol/ml， y为吸光度ΔA。

1. 组织：

（1）按样本重量计算

总巯基含量（μmol/g 鲜重）=（ΔA+0.0037）÷3.6222 ×V样总÷W

=0.276×（ΔA+0.0037）÷W

（2）按样本蛋白浓度计算

总巯基含量（μmol/mg prot）=（ΔA+0.0037）÷3.6222×V样总÷Cpr

=0.276×（ΔA+0.0037）÷Cpr

2. 血清、培养液：

总巯基含量（μmol/L）=（ΔA+0.0037）÷3.6222 ×5×10³

=1380×（ΔA+0.0037）

V样总：加入提取液体积，1ml；W：样品质量，g ；Cpr：样本蛋白浓度，mg/ml；5：血清，培养液等液体样本稀释倍数；10³ ：1mmol/L=10³μmol/ L

注意事项：

最低检出限为10μmol/L。