产品简介：

伊文思蓝（Evans Blue，CAS NO：314-13-6），也称作埃文斯蓝，是一种非膜渗透性的染料。当质膜受损，染料能进入细胞质和细胞核，从而将其染成蓝色，可用来检测细胞活力。伊文思蓝还能用来研究血脑屏障（BBB）渗透性，通过与白蛋白结合从而指示血脑屏障穿透蛋白能力。

本品为0.5%的伊文思蓝染色液，使用很方便，直接加入样本染色即可。

产品性质

CAS NO：314-13-6

化学名：6,6′-[(3,3′-Dimethyl[1,1′-biphenyl]-4,4′-diyl)bis(2,1-diazenediyl)]bis[4-amino-5-hydroxy-1,3- naphthalenedisulfonic acid] tetrasodium salt

同义名：Evans Blue tetrasodium salt伊文思蓝（埃文斯蓝）四钠盐；Direct blue 53直接蓝53；CI 23860；

分子式：C34H24N6Na4O14S4

分子量：960.82g/mol

使用方法

一、血脑屏障通透性

1.1 取处理后的动物（以小鼠为例），静脉注射伊文思蓝染色液（0.5%），使得小鼠眼睛、皮肤出现蓝色。0.5～1h 后处死小鼠，取出目的脑组织。【注意】：伊文思蓝染色液的注射用量需要根据动物类型以及体重来决定。

1.2将脑组织置于 1.5ml 离心管中，加入 1ml PBS，迅速用组织匀浆器将脑组织制成匀浆，4℃离心。

1.3取上清，加入等量三氯乙酸，4℃孵育。该步骤亦可采用如下操作：取上清，按上清：丙酮=3:7比例加入丙酮，室温孵育24h。

1.4 4℃离心15min。

1.5 取上述溶液，用分光光度计测 620 nm下的OD值。同时测定已知不同梯度的标准伊文思蓝的OD值，绘制标准曲线。根据标准曲线计算出待测样品的伊文思蓝含量。

二、细胞活力鉴定

2.1 取 100μl 重悬细胞到常规离心管内，加入100μl 伊文思蓝染色液（0.5%）轻轻混匀(染色时间可适当延长，但不宜超过 10min)。

2.2吸取少量经过染色后的细胞，用血细胞计数板计数。通常如果要比较精确地进行定量，每个细胞样品至少数500个细胞，数出蓝色细胞和细胞总数。

细胞存活率计算公式如下： 细胞存活率＝（细胞总数－蓝色细胞数）/细胞总数×100%

注意事项

1）  伊文思蓝对人体有轻微毒性，操作过程中请注意防护。

2）  为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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