DAPI，也称DAPI dihydrochloride，是一种常用的核酸染料，可以和双链DNA富含AT序列的小沟结合，产生比自身强20多倍的蓝色荧光。和EB(ethidium bromide)相比，DAPI对双链DNA的染色灵敏度要高很多倍。DAPI也可对RNA进行染色，染色机理是其可以选择性嵌入“AU序列”并发出荧光。相比DAPI-dsDNA(Ex/Em=358 nm/461 nm)，DAPI-RNA具有较长的最大发射波长(500 nm)，其荧光亮度仅有DAPI-dsDNA的20%。

尽管DAPI不能通过活细胞膜，但可以通过提高浓度使之进入活细胞。DAPI具有很高的光漂白承受水平，能用来检测酵母线粒体DNA，叶绿体DNA，病毒DNA，Microplasm DNA以及染色体DNA。

DAPI典型的蓝色荧光特性使其非常普遍的搭配其他绿色、黄色或红色荧光染料用于细胞生物学多色荧光标记技术，因此也常作为核酸和染色体的复染剂用于细胞凋亡检测、RNA原位杂交、直接或间接免疫检测等领域，其染色后可用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。

本产品为溶液，分为2种形式，浓度为5 mg/mL和即用型，即用型产品浓度已经过优化，确保可以满足各种常规染色的需要。另外提供粉末形式的DAPI供客户选购。

 产品性质

 中文名称（Chinese Synonym） 4’,6-联脒-2-苯基吲哚二盐酸盐

英文名称（English Synonym）4’,6-Diamidino-2-phenylindole, dihydrochloride

CAS号（CAS NO.）  28718-90-3

分子式（Molecular Fomular）  C16H17Cl2N5·2HCl

分子量（Molecular Weight）350.25

荧光光谱（Fluorescence Spectral）

DAPI的Ex/Em=340 nm/488 nm; DAPI-DNA的Ex/Em=358 nm/461 nm

使用方法

 1. 配制工作液：用双蒸水或PBS稀释母液，配制成所需要的工作的浓度（0.5-10 μg/mL）。【注：即用型不需要此操作】

2. 固定的细胞或组织染色：

对于固定的细胞或组织样品，固定后，适当洗涤去除固定剂。DAPI染色通常在其他染色的最后进行。如果不需要进行其它染色，则直接进行DAPI 染色。

a) 对于贴壁细胞或组织切片：加入适量DAPI染色液，覆盖住样品即可。

b) 对于悬浮细胞：至少加入待测染色样品体积3倍的染色液，混匀。室温放置3-5分钟。

c) 吸除DAPI染色液，用TBST、PBS或生理盐水洗涤2-3次，每次3-5分钟。

d) 直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。激发波长360 nm，发射波长460 nm。

3. 活细胞或组织染色：

a) 细胞培养物中加入适量DAPI染色液，约1/10细胞培养基体积，必须充分覆盖住待染色的样品。通常对于六孔板一个孔需加入1 mL染色液，对于96孔板一个孔需加入100 μL染色液。

b) 在37℃培养细胞 10～20 分钟。

c) 用 PBS或合适的缓冲液洗细胞两次。

d) 直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。激发波长360 nm，发射波长460 nm。

运输与保存方法

 冰袋运输，5 mg/mL的DAPI储存液于-20ºC避光保存，1年有效。即用型的DAPI 染液于4℃避光保存，有效期6个月。

注意事项

1）DAPI对人体有一定刺激性，请注意适当防护。

2）荧光染料都存在淬灭的问题，建议染色后尽量当天完成检测。

3）为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片液。

4）低浓度的DAPI不容易穿透细胞膜。

5）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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